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学习的人员发展好几个种Kdm2b染色体的选择性型LncKdm2b（divergent lncRNA），该LncRNA在母乳喂奶节肢动物中传统，并在胚胎干神经元（ESCs）和前期胚胎中高表达爱。敲除LncKdm2b会的危害胚胎干神经元（ESC）自身表现发展升级刷新时间并会导致胚胎前期伤人。LncKdm2b依据反式目的促使Snf2涉及到CREBBP激话蛋白质（SRCAP）组合物的装设和ATPase灵活性来激话Zbtb3，以Nanog染色体根据性模式方法开展ESC的自身表现发展升级刷新时间。该学习然而体现 选择性型lncRNAs呈现了ESCs自身表现发展升级刷新时间和前期胚胎遭受的另一个说的是种控制模式方法。

探究新线路

的技术方式方法

RNA-seq、Affymetrix遗传基因电子器件、RNA-FISH、CRISPR-Cas9、流式上皮细胞术上皮细胞术、免疫性共放置、RNA pulldown、CHIRP、色谱进行分析、EMSA等技能行为。

分析结果显示

1、LncKdm2b在胚胎干细胞（ESCs）和早期胚胎中高表达。

论述者分为胚胎干生殖細胞做RNA测序，挖掘LncKdm2b在前面胚胎干生殖細胞中高传达爱，综合排名很靠前。（图1）对应进行PCR、northern blot、RNA-Fish进一个步骤单位证明了在前面胚胎干生殖細胞中LncKdm2b是高传达爱的。

图1

2、LncKdm2b敲除会损害胚胎干细胞（ESC）自我更新并导致早期胚胎死亡。

钻研技能人员在CRISPR/Cas9染色体敲除技能敲除lncKdm2b外显子2，开发lncKdm2b染色体敲除小鼠模型工具，进行试验最终结果表面，lncKdm2b染色体敲除小鼠ESCs的自我发展发展创新时间被损毁，致使早期的胚胎死亡者，能开性相关内容染色体的表现量也重要拉低。LncKdm2b的Rescue进行试验后ESCs的自我发展发展创新时间技能会恢复正常。

图2

3、LncKdm2b通过反式作用促进Snf2相关CREBBP激活蛋白（SRCAP）复合物的组装和ATP酶活性。

以往设计出现 LncKdm2b不后果Kdm2b这款表观遗传，我确认怪物素图标RNA pulldown科学试验，识別小鼠ESCs裂解物中隐性与LncKdm2b各种相关的搭配蛋清，再确认免疫抗体印刷痕迹、CHIRP、共追踪定位、RIP等科学试验是因为，LncKdm2b确认反式做用与SRCAP搭配并有利于促进其ATP酶可溶性。 

图3

4、LncKdm2b促进SRCAP和ATP酶活性，进一步调控Zbtb3的转录。

研究人员通过Affymetrix转录组芯片分析敲除LncKdm2b与WT的ESCs，发现10个下调最大的转录因子。通过shRNA的实验，只有Zbtb3能降低ESCs的菌落的数量。更多的RNA FISH/RIP/RNA pull down/免疫印迹实验，LncKdm2b调控了SRCAP基因对Zbtb3的转录，而SRCAP基因缺失无法激活Zbtb3的转录。并且，Zbtb3或SRCAP基因缺失损害ESCs的自我更新，而过表达SRCAP可逆转这一现象。

图4

5、Zbtb3通过促进Nanog基因表达调控ESCs的自我更新。

LncKdm2b依据有助于SRCAP組裝和 ATP酶活性氧更改密码Zbtb3，转而有助于ESCs自行升级的创新及胚胎健康发育。Zbtb3依据Nanog染色体根据房产调控ESCs的自行升级的创新，Zbtb3的缺损损坏ESCs的自行升级的创新。

图5

规范专著

Ye Buqing,Liu Benyu,Yang Liuliu et al. LncKdm2b controls self-renewal of embryonic stem cells via activating expression of transcription factor. EMBO J., 2018.


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Affymetrix Clariom S/Primeview系列（即转录组芯片），LncRNAs功能研究/机制研究的利器，敲除/过表达目标LncRNAs后，通过该芯片表达产品可以发现上游调控的转录因子，下游的靶向蛋白/靶向通路。

 

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